广东紫珠CallicarpakwangtungensisChun系马鞭草科紫珠属植物，又名止血柴、紫珠草、金刀菜等，分布于我国江西、广东、贵州等地，并在江西萍乡等地有广泛栽培[1]。广东紫珠以干燥茎枝及叶入药，新收录于2010年版《中国药典》，具有收敛止血、清热解毒之功效，民间主要用于治疗偏头痛、吐血、跌打肿痛和外伤出血，临床主要用于治疗宫颈糜烂出血、阴道炎及宫颈炎等，是“抗宫炎片”和“抗宫炎胶囊”等中成药的主要原料药材。
[摘要]应用各种色谱技术对广东紫珠中咖啡酰基苯乙醇苷类化合物进行分离纯化，采用NMR和质谱等波谱学手段对单体化合物进行结构鉴定。从广东紫珠地上部位的醇提物中共分离得到10个咖啡酰基苯乙醇苷类化合物，鉴定为2′-乙酰基毛蕊花糖苷（1），管花苷E（2），毛蕊花糖苷（3），管花苷B（4），异毛蕊花糖苷（5），alyssonoside（6），2′-乙酰基连翘酯苷B（7），江藤苷（8），连翘酯苷B（9），金石蚕苷（10）。化合物4是首次从马鞭草科植物中分离得到，化合物6是首次从紫珠属植物中分离得到，化合物1，2，5，7均为首次从该植物中分离得到。
[关键词]药学论文发表,马鞭草科,广东紫珠,咖啡酰基苯乙醇苷
金石蚕苷和连翘酯苷B，作为2个比较常见的咖啡酰基苯乙醇苷类化合物，是广东紫珠药材质量控制的指标性成分，然而，对广东紫珠中化学成分的报道多见黄酮类和三萜类化合物[2-4]，而咖啡酰基苯乙醇苷类化合物却少有报道，直到最近，有学者通过LC-DAD-MS联用技术从广东紫珠提取物中鉴定出5个该类化合物[5]。作者对广东紫珠地上部分的醇提物进行HPLC-DAD分析发现，一系列色谱峰表现出咖啡酰基苯乙醇苷类化合物的紫外光谱特征。因此，作者对广东紫珠中主要的咖啡酰基苯乙醇苷类化合物进行分离纯化鉴定，共得到10个苯乙醇苷类化合物，其中化合物4是首次从马鞭草科植物中分离得到，化合物6是首次从紫珠属植物中分离得到，化合物1，2，5，7为首次从该植物中分离得到。
1材料
DRX400型核磁共振仪（德国Bruker公司）；ZQ2000型质谱仪（美国Waters公司）；中低压柱色谱仪（日本YMC公司）；制备液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；SephadexLH-20（美国GEHealthCare）；半制备色谱柱SepaxAmethystC18column（10.0mm×150mm，5μm；美国SepaxTechnologies公司）；制备色谱柱UltimateXB-C18column（21.2mm×250mm，5μm；美国WelchMaterials公司），薄层色谱GF254硅胶预制板（10～40μm）和柱色谱硅胶（200～300目）均为青岛海洋化工有限公司生产；乙腈（HPLC级，江苏汉邦有限公司），其他试剂均为分析纯；金石蚕苷、连翘酯苷B对照品（上海源叶生物科技有限公司，20mg/支，纯度>98%）。
广东紫珠采于2011年10月采自江西省萍乡，经萍乡市食品药品监督检验所黄光磊主任药剂师鉴定为马鞭草科植物广东紫珠C.kwangtungensis的干燥地上部分，凭证保存于上海医药工业研究院中药研究部。
2提取分离
广东紫珠地上部位粗粉（5kg）用10倍量的60%乙醇回流提取2次，每次2h，合并提取液，过滤，浓缩至无醇味，上AB-8大孔吸附树脂柱，15%乙醇除杂至洗出液近澄清，用40%乙醇洗脱，跟踪色带，至色带全部洗脱下来，收集醇洗液，减压浓缩得广东紫珠干浸膏150g。干浸膏经过硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（5∶1～4∶1～3∶1～2∶1～1∶1）梯度洗脱，得到6个组分A～F。
组分C经ODS中低压快速分离色谱，以乙腈水（2∶8～3∶7）梯度洗脱，得到组分C1～C4。组分C3经半制备HPLC（23%乙腈，流速2mL・min-1，检测波长332nm）纯化得到化合物7（40mg，tR=25.3min）；组分C4经半制备HPLC（25%乙腈，流速2mL・min-1，检测波长332nm）纯化得到化合物2（20mg，tR=24.0min），4（15mg，tR=27.4min）。组分D经ODS中低压快速分离色谱，以乙腈水（2∶8～3∶7）梯度洗脱，得到组分D1～D3。D2经SephadexLH-20凝胶柱色谱得到组分D2a～D2c，D2a经制备HPLC（23%乙腈，流速10mL・min-1，检测波长332nm）纯化得到化合物6（60mg，tR=20.2min），1（40mg，tR=24.8min）；D2c经制备HPLC（21%乙腈，流速10mL・min-1，检测波长332nm）纯化得到化合物3（55mg，tR=19.7min），5（20mg，tR=23.2min）；D3经制备HPLC（23%乙腈，流速10mL・min-1，检测波长332nm）纯化得到化合物8（100mg，tR=28.6min）。组分E经ODS中低压快速分离色谱，以乙腈水（1.8∶8.2～2.5∶7.5）梯度洗脱，得到组分E1～E3。组分E2经制备HPLC（20%乙腈，流速10mL・min-1，检测波长332nm）得到化合物9（200mg，tR=20.2min），10（300mg，tR=24.5min）。
3结构鉴定
化合物1白色无定形粉末。ESI-MSm/z665[M-H]-。1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.59（1H，d，J=16.0Hz，H-7），7.04（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.94（1H，dd，J=2.0，8.4Hz，H-6），6.78（1H，d，J=8.4Hz，H-5），6.67（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.64（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.52（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.26（1H，d，J=16.0Hz，H-8），4.98（1H，t，J=9.2Hz，H-4′），4.87（1H，t，J=8.4Hz，H-2′），4.80（1H，d，J=1.6Hz，H-1″），4.52（1H，d，J=8.0Hz，H-1′），4.05（1H，m，H-8a），4.00（1H，t，J=9.2Hz，H-3′），3.68～3.64（1H，m，H-8b），3.66～3.62（1H，m，H-6′a），3.63（1H，dd，J=1.6，3.2Hz，H-2″），3.59～3.53（1H，m，H-5′），3.53～3.49（1H，m，H-6′b），3.59～3.53（1H，m，H-3″），3.53～3.49（1H，m，H-5″），3.25（1H，t，J=9.2Hz，H-4″），2.69（2H，m，H-7），1.98（3H，s，2′-COCH3），1.07（3H，d，J=6.0Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[6]基本一致，化合物1鉴定为2′-乙酰基毛蕊花糖苷（2′-acetylacteoside）。化合物2白色无定形粉末。ESI-MSm/z649[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.65（1H，d，J=16.0Hz，H-7），7.44（2H，d，J=8.8Hz，H-2，6），6.80（2H，d，J=8.8Hz，H-3，5），6.67（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.64（1H，d，J=1.6Hz，H-2），6.52（1H，dd，J=1.6，8.0Hz，H-6），6.32（1H，d，J=16.0Hz，H-8），4.99（1H，t，J=9.2Hz，H-4′），4.87（1H，t，J=9.2Hz，H-2′），4.80（1H，brs，H-1″），4.52（1H，d，J=8.0Hz，H-1′），4.05（1H，m，H-8a），4.00（1H，t，J=9.2Hz，H-3′），3.80（1H，m，H-6′a），3.68～3.60（1H，m，H-8b），3.64（1H，brs，H-2″），3.59～3.54（1H，m，H-5′），3.53～3.49（1H，m，H-6′b），3.53～3.49（1H，m，H-3″），3.53～3.49（1H，m，H-5″），3.25（1H，t，J=9.6Hz，H-4″），2.69（2H，m，H-7），1.98（1H，s，2′-COCH3），1.06（3H，d，J=6.4Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[7]基本一致，化合物2鉴定为管花苷E（tubulosideE）。
化合物3白色无定形粉末。ESI-MSm/z623[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.58（1H，d，J=16.0Hz，H-7），7.05（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.95（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.77（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.69（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.67（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.56（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.27（1H，d，J=16.0Hz，H-8），5.18（1H，d，J=1.6Hz，H-1″），4.90（1H，t，J=9.2Hz，H-4′），4.36（1H，d，J=7.2Hz，H-1′），4.03（1H，m，H-8a），3.91（1H，dd，J=1.6，3.2Hz，H-2″），3.83～3.78（1H，m，H-6′a），3.81（1H，t，J=9.2Hz，H-3′），3.73（1H，m，H-8b），3.63～3.57（1H，m，H-6′b），3.63～3.57（1H，m，H-3″），3.63～3.57（1H，m，H-5″），3.56～3.50（1H，m，H-5′），3.39（1H，t，J=8.8Hz，H-2′），3.28（1H，t，J=9.2Hz，H-4″），2.79（2H，brt，J=7.2Hz，H-7），1.09（3H，d，J=6.4Hz，H-6″），13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[8]数据基本一致，鉴定化合物3为毛蕊花糖苷（acteoside）。
化合物4白色无定形粉末。ESI-MSm/z665[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.59（1H，d，J=16.0Hz，H-7），7.04（1H，d，J=1.6Hz，H-2），6.91（1H，dd，J=1.6，8.0Hz，H-6），6.77（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.63（1H，d，J=1.6Hz，H-2），6.64（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.49（1H，dd，J=1.6，8.0Hz，H-6），6.26（1H，d，J=16.0Hz，H-8），4.90（1H，brs，H-1″），4.79（1H，t，J=9.2Hz，H-2′），4.50（1H，dd，J=2.0，12.0Hz，H-6′a），4.47（1H，d，J=8.4Hz，H-1′），4.36（1H，dd，J=5.6，12.0Hz，H-6′b），4.00～3.93（1H，m，H-2″），4.00～3.93（1H，m，H-5″），3.96（1H，m，H-8a），3.69～3.61（1H，m，H-8b），3.69～3.61（1H，m，H-3″），3.60～3.56（1H，m，H-5′），3.48（1H，t，J=9.2Hz，H-3′），3.40～3.35（1H，m，H-4″），3.37（1H，t，J=9.2Hz，H-4′），2.68（2H，brt，J=7.6Hz，H-7），1.97（3H，s，-2′COCH3），1.23（3H，d，J=6.4Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[6]基本一致，化合物4鉴定为管花苷B（tubulosideB）。
化合物5白色无定形粉末。ESI-MSm/z623[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.59（1H，d，J=16.0Hz，H-7），7.04（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.67（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.88（dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.77（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.53（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.26（1H，d，J=16.0Hz，H-8），5.16（1H，brs，H-1″），4.49（1H，dd，J=2.0，12.0Hz，H-6′a），4.35（1H，dd，J=5.6，12.0Hz，H-6′b），4.32（1H，d，J=8.0Hz，H-1′），4.00～3.94（1H，m，H-2″），4.00～3.94（1H，m，H-5″），3.96（1H，m，H-8a），3.72～3.67（1H，m，H-8b），3.72～3.67（1H，m，H-3″），3.55～3.50（1H，m，H-5′），3.52（1H，t，J=8.8Hz，H-3′），3.42～3.37（1H，m，H-4″），3.40（1H，t，J=9.2Hz，H-4′），3.14（1H，t，J=8.4Hz，H-2′），2.77（2H，brt，J=7.2Hz，H-7），1.24（3H，d，J=6.4Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[9]基本一致，化合物5鉴定为异毛蕊花糖苷（isoacteoside）。化合物6白色无定形粉末。ESI-MSm/z769[M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.65（1H，d，J=16.0Hz，H-7″″），7.18（1H，d，J=2.0Hz，H-2″″），7.08（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6″″），6.81（1H，d，J=8.0Hz，H-5″″），6.68（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.65（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.57（1H，dd，J=2.0，8.0Hz，H-6），6.35（1H，d，J=16.0Hz，H-8″″），5.19（1H，d，J=1.6Hz，H-1），4.93（1H，t，J=9.2Hz，H-4″），4.90（1H，d，J=2.0Hz，H-1），4.36（1H，d，J=7.6Hz，H-1′），4.00（1H，m，H-8a），3.92（1H，d，J=9.6Hz，H-4a），3.90（1H，brs，H-2″），3.88（3H，s，3″″-OCH3），3.86（1H，d，J=2.0Hz，H-2），3.80（1H，t，J=9.2Hz，H-3′），3.78～3.72（1H，m，H-6′a），3.74～3.69（1H，m，H-5′），3.70（1H，d，J=9.6Hz，H-4′b），3.69～3.65（1H，m，H-8b），3.58～3.54（1H，m，H-3″），3.58～3.54（1H，m，H-5″），3.54（2H，s，H-5），3.49～3.56（1H，m，H-6′b），3.39（1H，t，J=8.8Hz，H-2′），3.29（1H，overlap，H-4″），2.79（2H，t，J=7.2Hz，H-7），1.09（3H，d，J=6.4Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表2。以上数据与文献[10]数据基本一致，鉴定化合物6为alyssonoside。
