[摘要] 目的 观察天麻细粉片在实验动物中的毒性和安全性。 方法 急性毒性试验采用昆明种小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，天麻细粉片剂量为15.0 g/kg体重，观察14 d，记录中毒表现。Ames试验采用了菌株TA97、TA98、TA100和TA102，在加S9与不加S9的条件下加入天麻细粉片，剂量分别为8、40、200、1000、5000 μg/皿。小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸变试验均采用昆明种小鼠，天麻细粉片剂量为1.25、2.50、5.00 g/kg体重，用环磷酰胺40 mg/kg体重为阳性对照。30 d喂养试验采用SD大鼠，雌、雄各40只，天麻细粉片剂量为2.81、5.62、11.25 g/kg体重，连续给予30 d，观察动物一般状况和体重，测定血液学及血液生化学指标、脏器系数，并进行组织病理学检查。 结果 急性毒性试验结果显示天麻细粉片在小鼠和大鼠中的最大耐受剂量(MTD)均>15.0 g/kg体重，属无毒级。天麻细粉片的Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸变试验结果均为阴性。30 d喂养试验显示动物一般状况良好，各剂量天麻细粉片对动物的体重、进食量、食物利用率以及脏器重量和脏器系数均无明显影响，对动物的血常规和血清生化指标也无明显影响。病理检查显示高剂量天麻细粉片对动物的肝、肾、胃肠、脾、卵巢(睾丸)等组织无明显毒性。 结论 本实验条件下天麻细粉片未见明显毒性或致畸和致突变作用。
[关键词]药学论文发表, 天麻细粉片,毒性,安全性
天麻(Gastrodia elata)为兰科植物，《中国药典》记载，天麻味甘，性微湿，入肝经，具有平肝熄风，祛风定惊的功效。天麻中含有多种成分，如天麻素(gastrodin)、香荚兰醛(vanilline)、香荚兰醇(vanillyl alcohol)、维生素A类、对羟基苯甲醛(P-hydroxybenzaldehyde)、对羟基苯甲醇(P-hydroxybenzyl alcohol)、琥珀酸(succinic acid)、胡萝卜苷、谷甾醇、枸橼酸、抗真菌蛋白和许多微量元素如铁、氟、锰、锌、碘等[1-2]。有研究表明，天麻粉及天麻细粉制成的片剂具有降血脂、降胆固醇、降低密度脂蛋白、降血糖等作用[3-6]。有报道表明，天麻粉在脂肪乳剂灌胃的大鼠中具有显著的降血脂、减少肝脏脂肪蓄积、减轻肝脏脂肪变性及改善肝功能的作用[6]。但天麻细粉片剂型的毒理学实验研究未见报道，本文针对天麻细粉片进行毒性及安全性评价的实验研究。
1 材料与方法[7]
1.1 样品
天麻细粉片由北京永康格林科技有限公司提供，批号090720，0.75 g/片[5]。
1.2 急性毒性试验
昆明种小鼠(合格证号：0157223，体重18～22 g)和SD大鼠(合格证号：0157222，体重180～220 g)均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，雌雄各10只，SPF级。实验动物房许可证号：SYXK(豫)2007-0008，屏障环境。实验方法为最大耐受剂量(MTD)法，天麻细粉片剂量为15.0 g/kg体重。具体试验方法参考文献报道[8]。观察周期为14 d，期间记录各组动物的中毒表现或死亡时间。
1.3 Ames试验
菌株TA97、TA98、TA100和TA102由天津市疾控中心提供，S9活化系统由河南省疾病预防控制中心毒理室制备，具体试验方法均参考文献报道[8]。剂量选择：天麻细粉片分为5个剂量组，分别为8、40、200、1000、5000 μg/皿。阳性对照分别为3-硝基9-芴酮、甲基甲烷磺酸酯、2-氨基芴或1，8-二羟基蒽醌[8]，均购自Sigma-Aldrich公司。本试验在加S9与不加S9的条件下均各重复2次，每次3个平行板。
1.4 骨髓细胞微核试验
采用昆明种小鼠(合格证号：0157223，体重25～30 g)，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，SPF级，雌雄各25只。具体试验方法参考文献报道[8]，小鼠分为5个组，即溶剂对照组、天麻细粉片3个剂量组(分别为1.25、2.50、5.00 g/kg体重)和阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg体重，由南通精华制药有限公司提供，批号H32020796)。
1.5 小鼠精子畸变试验
采用昆明种小鼠(合格证号：0157223，体重25～35 g)，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，雄性38只，SPF级。具体试验方法参考文献报道[8]。天麻细粉片和环磷酰胺(由南通精华制药有限公司提供，批号H32020796)剂量同骨髓细胞微核试验。
1.6 30 d喂养试验
1.6.1 动物 采用SD大鼠(合格证号：0157222)，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，SPF级，雌、雄各40只，分别按体重随机分为4组，每组10只。
1.6.2 剂量 天麻细粉片分低、中、高3个剂量组，分别为人体推荐量[5]的25、50、100倍，即2.81、5.62、11.25 g/kg体重。受试物采用掺入饲料法给予，用去除辅料乳糖、预胶化淀粉、硬脂酸镁的样品作为受试物(相当于去除50%辅料)。分别称取受试物98.44、196.88、393.75 g，酪蛋白(北京维通利华实验动物技术有限公司提供)19.69、39.38、78.75 g加粉饲料至7 kg混匀即成低、中、高3种不同样品含量的饲料，连续给予30 d。
1.6.3 观察指标 分别观察动物的一般状况、生长发育指标、血液学及血液生化学检查、脏器系数，并进行病理组织学检查，具体试验方法均参考文献报道[8]。 1.7 统计学分析
采用SPSS 11.0统计软件进行数据分析，计量资料采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 急性毒性试验
天麻细粉片对小鼠和大鼠的急性毒性试验结果见表1。雌、雄小鼠和大鼠经天麻细粉片空腹灌胃后观察14 d均未见中毒症状，无死亡。本试验中天麻细粉片经口急性毒性试验的MTD>15.0 g/kg体重，属无毒级。
2.2 Ames试验
Ames试验的结果见表2，阳性对照组在加S9或不加S9条件下均导致回复突变菌落数明显增加，与空白对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01);天麻细粉片各剂量组在加S9或不加S9条件下均未引起回复突变菌落数增加，与空白对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示天麻细粉片Ames试验结果为阴性。
2.3 小鼠骨髓细胞微核试验
环磷酰胺导致小鼠骨髓细胞微核率显著增加(P<0.01)，天麻细粉片各剂量组微核率与溶剂对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)(表3)，提示天麻细粉片小鼠骨髓细胞微核试验阴性。
2.4 小鼠精子畸变试验
环磷酰胺处理小鼠后精子畸形率显著增加，与溶剂对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01);天麻细粉片各剂量组精子畸形率未见明显变化，与溶剂对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)(表4)，提示天麻细粉片小鼠精子畸变试验阴性。
2.5 30 d喂养试验
2.5.1 动物一般状况 试验期间各组动物的一般状况未见明显异常。
2.5.2 天麻细粉片对大鼠体重、进食量和脏器系数的影响 试验期间各剂量天麻细粉片对动物的体重未造成明显影响，与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。各剂量天麻细粉片对动物的进食量、食物利用率以及肝、肾、脾、性腺等脏器的重量和系数无明显影响(数据未显示)(表5)。
2.5.3 血液学和血清生化检查结果 各剂量天麻细粉片对动物的血常规指标以及血清生化指标无明显影响(表6)。
2.5.4 病理组织学检查 各剂量天麻细粉片给药后肉眼观察动物脏器颜色、形状、大小等均未见明显病变。病理检查标本为对照组和天麻细粉片高剂量组的肝、肾、胃、肠、脾、卵巢(睾丸)。标本系甲醛固定，经水洗、修块、脱水、石蜡包埋、切片、HE染色。结果(表7)显示，对照组20只大鼠中有2例动物肝小叶有少量炎性细胞浸润，1例动物肝脏汇管区有少量炎性细胞浸润;天麻细粉片高剂量组20只大鼠中有2例动物肝脏汇管区有少量炎性细胞浸润;其他脏器均未观察到明显病理改变。高剂量天麻细粉片对动物的肝、肾、胃肠、脾、卵巢(睾丸)等组织无明显毒性。
3 讨论
天麻作为天然药物在我国已有超过一千年的应用历史。目前，天麻及其制剂在临床上主要用于治疗神经系统疾病如癫痫、眩晕等[9]。此外，天麻还具有代谢调节[3-6]、抗炎[10-11]和抗血小板聚集[12]等药理作用，具有广阔的临床应用前景。尽管大部分报道显示天麻安全性好，毒副作用小[3-6]，但对其片剂进行系统性的毒理学研究尚未见报道。
本文实验结果显示，天麻细粉片在小鼠和大鼠中的口服MTD>15.0 g/kg体重，属无毒级。天麻细粉片的Ames试验、骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸变试验结果均为阴性，提示无致畸和致突变的作用。大鼠30 d喂养试验显示天麻细粉片在雌、雄大鼠中剂量为11.25 g/kg体重(相当于人体推荐量的100倍)时对血液学和组织器官病理学检测指标无明显影响。
有关天麻制成的其他剂型的毒性研究也有报道。如天麻软胶囊的毒性研究显示[13]，对小鼠经口MTD>15.0 g/kg体重，大鼠30 d喂养试验未观察到中毒表现，给药组动物的体重、食物利用率、血液学和血液生化等指标值、各脏器的脏/体比值与空白对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。天麻镇眩颗粒毒理学实验研究显示，其在小鼠中的MTD>140 g/kg体重，且长期连续口服给药安全[14]。SD大鼠连续30 d给予天麻药材粉5.845 g/kg体重未观察到有害作用[15]。妊娠期SD大鼠给予天麻药材粉6.16 g/kg体重对胚胎及胎仔发育无明显毒性作用[16]。
综上所述，本研究为天麻片剂的临床应用提供了安全性数据，结合本实验研究与文献报道[13-16]，天麻制剂无论是片剂、胶囊还是粉剂，在动物中均未观察到明显毒副作用以及致畸和致突变作用。由于动物实验中天麻的剂量远高于人体推荐量，提示天麻在临床推荐剂量下应用安全可靠。
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